故事围绕着五位主角展开。在大学任职教授的泰德（乔什·拉德诺JoshRadnor饰）还在感情路上寻寻觅觅，等待真命天女的到来。这天，巴尼（尼尔·帕特里克·哈里斯NeilPatrickHarris饰）

只因不小心被一只受过放射性感染的蜘蛛咬伤，平凡瘦弱的高中生彼得·本杰明·帕克（尼尔·帕特里克·哈里斯NeilPatrickHarris饰）的人生便发生了翻天覆地的变化。从此以后，他穿上红蓝相间的紧身服，戴上面具，凭借发射出的蜘蛛丝穿梭在喧哗闹市的每一个角落。“能力越大，责任越大”，彼得以蜘蛛侠的身份，和破坏城市及世界和平的恶势力作斗争。全新的征程，更强大的敌人，女武士鹿田、TheTalo、电王（EthaEmbry配音）、蜥蜴人（罗布·赞比RobZombie配音）、银貂（VirgiiaMadse配音）等可怕